Agência Fiocruz de Notícias

Avaliar a eficiência de um método molecular Multiplex Allele-Specific-PRC (MAS-PCR) na identificação de cepas Mycobacterium tuberculosis resistentes e multirresistentes, comparando os resultados alcançados com os métodos fenotípicos (proporção-TS) e genotípicos (sequenciamento) como ferramenta de apoio ao diagnostico da tuberculose multiresistente (TBMR), foi o objetivo de um estudo desenvolvido no Laboratório de Referência Nacional da Tuberculose do Centro de Referência Prof. Hélio Fraga, vinculado à Escola Nacional de Saúde Pública (Ensp/Fiocruz), sob a coordenação do pesquisador Paulo Caldas. O quadro vem se agravando devido ao vírus da Aids e ao surgimento de cepas Mycobacterium tuberculosis resistentes e multirresistentes, tornando-se necessário um diagnóstico mais preciso por meio de cultura de MTB e do teste de sensibilidade. Tais métodos são demorados e esse período longo, no diagnóstico da TBMR, representa um risco maior para o doente. A tuberculose é uma doença responsável por 3 milhões de óbitos e infecta 8,8 milhões de pessoas por ano no mundo.

O método MAS-PCR baseia-se em uma técnica simplificada de PCR e eletroforese em gel de agarose para identificar alelos específicos independentes, nos quais ocorrem as mutações mais frequentes associadas à resistência a Rifampicina e Isoniazida em cepas do MTB. Utilizam-se três alvos (códons) do gene rpoB, 531, 526 e 516 e um alvo (códon) do gen KatG 315 simultaneamente. A análise é efetuada a partir de culturas de escarro.

Para desenvolver o estudo foram avaliadas 26 cepas de MTB do banco de dados do laboratório da instituição. Todas foram previamente submetidas ao método das proporções e ao sequenciamento e, em seguida, avaliadas pelo MAS-PCR para a confirmação do perfil de sensibilidade e resistência e das mutações associadas à resistência às drogas (Rifampicina e Isoniazida), simultaneamente.

Das 26 cepas estudadas, 22 eram TB-MR e 4 eram sensíveis, sendo também analisada a cepa referência H37Rv como padrão de controle do método. Dentre as 22 cepas TB-MR, 16 apresentaram mutações simultaneamente nos genes rpoB e katG, confirmando o diagnóstico da TBMR. A comparação do método MAS-PRC com o teste de sensibilidade apresentou uma concordância de 0,5, enquanto que a comparação do MAS-PCR com o sequenciamento apontou uma concordância de 0,9. Os dados do estudo sugerem que a técnica de MAS-PCR pode se tornar uma alternativa mais rápida, eficaz e sensível no diagnóstico precoce da tuberculose multirresistente, caso seja aperfeiçoada por meio de novos alvos moleculares.

Publicado em 16/1/2012.